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分子生物學(xué)常用溶液配制

一、分子生物學(xué)常用貯存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】將29g丙怖酷膠和1gN，N’-亞甲雙丙怖酷膠溶于總體積為60ml的水中。加熱至37校溶解之，補(bǔ)加水至終體積為100ml。用濾器（0.45μm孔徑）過(guò)濾除菌，查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0，置棕色瓶中保存于室溫?！咀⒁狻勘揽崮z具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性并可以通過(guò)皮膚吸收，其作用具累積性。稱量丙怖酷膠和亞甲雙丙怖酷膠時(shí)應(yīng)戴手套和面具?？烧J(rèn)為聚丙怖酷膠無(wú)毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)樗€可能會(huì)含有少量未聚合材料。一些價(jià)格較低的...

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SDS-PAGE 膠染色介紹

一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較二、考馬斯亮藍(lán)染色CBB染色液0.5%考馬斯亮藍(lán)G250或R25040%甲醇10%乙酸將CBB溶于甲醇中并不停的攪拌15min。加入乙酸與ddH2O脫色液：30%甲醇10%乙酸染色方法：1.在搖床上染色30min.2.脫色至蛋白點(diǎn)或條帶清晰可見3.ddH2O洗3-5次三、膠體考馬氏亮藍(lán)染色ColloidalCoomassieStaining（Cambridgecentreforporteomics）sensitivity=~100ng1.固定：...

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雙向電泳的樣品的制備及電泳實(shí)驗(yàn)步驟

樣品制備原則樣品制備是雙向電泳中最關(guān)鍵的一步，將直接影響2-DE結(jié)果好壞。目前并沒有一個(gè)通用的樣品制備方法，盡管處理方法多種多樣，但都遵循幾個(gè)基本的原則：1）盡可能的提高樣品蛋白的溶解度，抽提最大量的總蛋白，減少蛋白質(zhì)的損失；2）減少對(duì)蛋白質(zhì)的人為修飾；3）破壞蛋白質(zhì)與其他生物大分子的相互作用，并使蛋白質(zhì)處于變性狀態(tài)。根據(jù)這一原則，樣品制備需要四種主要的試劑：離液劑(chaotropes),主要包括尿素（Urea）和硫脲（thiourea）；表面活性劑（sufactants）...

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免疫熒光標(biāo)記法

免疫熒光標(biāo)記法1、細(xì)胞膜上的免疫熒光檢測(cè)法間接標(biāo)記法1)制備單細(xì)胞懸液；2)細(xì)胞計(jì)數(shù)，取出1×106個(gè)細(xì)胞于試管中；3)用臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)活細(xì)胞數(shù)，要求活細(xì)胞數(shù)90～95%；4)在試管中加入一抗，（劑量按照說(shuō)明書的要求），孵育30～60分鐘；5)PBS洗滌1～2次，1500rpm，離心3分鐘，棄上清；6)加入二抗，孵育20～30分鐘；7)PBS洗一次，1500rpm，離心3分鐘，棄上清;8)加300μlPBS，上機(jī)檢測(cè)(若不能及時(shí)上機(jī)檢測(cè)，可加1ml1%多聚甲醛固定，可放置1周)...

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細(xì)胞凋亡檢測(cè)及分子生物學(xué)檢測(cè)步驟

細(xì)胞凋亡檢測(cè)及分子生物學(xué)檢測(cè)步驟：1、細(xì)胞DNA含量分布（由細(xì)胞DNA降解方式檢測(cè)細(xì)胞凋亡）收集已固定的單細(xì)胞懸液約5×105~1×106/ml；離心除去固定液，3mlPBS重懸細(xì)胞;使用低速離心機(jī)1500rpm離心，5分鐘，棄去PBS；加PI染液1ml，室溫避光20分鐘；調(diào)整細(xì)胞濃度5×105/ml；上機(jī)檢測(cè)。2、磷脂酰絲氨酸外翻分析檢測(cè)細(xì)胞凋亡1)常規(guī)制備單細(xì)胞懸液,用PBS洗兩次.(若為全血要先溶血),取約5×106個(gè)細(xì)胞，1500rpm離心,棄上清,用400μl1×B...

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